10X TBE Protocol de rețetă electroforeză sau rețetă

TBE și TAE sunt utilizate ca tampoane în biologia moleculară, în principal pentru electroforeză acizilor nucleici. Tampoanele Tris sunt utilizate în condiții de pH ușor de bază, ca în cazul electroforezei ADN, deoarece acest lucru păstrează ADN-ul solubil în soluție și deprotonat astfel încât va fi atras de electrodul pozitiv și va migra prin a gel. EDTA este un ingredient în soluție, deoarece acest lucru comun agent de chelare protejează acizii nucleici de degradarea de către enzime. EDTA chelează cationii divalenți care sunt cofactori pentru nucleazele care pot contamina proba. Cu toate acestea, având în vedere că cationul de magneziu este un cofactor pentru ADN-polimeraza și enzimele de restricție, concentrația de EDTA este menținută în mod intenționat scăzută (în jur de 1 mM).

Nu trebuie să sterilizați soluția. Deși pot apărea precipitații după o perioadă de timp, soluția de stoc este încă utilizabilă. Puteți ajusta pH-ul folosind un contor de pH și adăugare în picătură de concentrat

instagram viewer
acid clorhidric (HCl). Este bine să păstrați tamponul TBE la temperatura camerei, deși este posibil să doriți să filtrați soluția stoc printr-un filtru de 0,22 microni pentru a elimina particulele care ar favoriza precipitațiile.

Utilizarea unei soluții stoc 5X sau 10X din greșeală vă va da rezultate slabe, deoarece va genera cantitate de căldură. Pe lângă faptul că vă oferă o rezoluție slabă, eșantionul poate fi deteriorat.

Deși TBE și TAE sunt tampoane comune de electroforeză, există alte optiuni pentru soluții conductoare cu molaritate scăzută, inclusiv tampon de borat de litiu și tampon de borat de sodiu. Problema cu TBE și TAE sunt că tampoanele bazate pe Tris limitează câmpul electric care poate fi utilizat în electroforeză, deoarece prea multă încărcare provoacă o temperatură scăpată.

instagram story viewer