Fragmentul de restricție Lungimea polimorfismului (RFLP) este o metodă moleculară de analiză genetică care permite identificarea indivizilor pe baza tiparelor unice de enzima de restricție tăiere în regiuni specifice de ADN.
De asemenea, denumită analiză RFLP, tehnica profită de polimorfisme în codurile genetice ale persoanelor individuale. Chiar dacă toți membrii unei specii au în esență același machiaj genetic, aceste mici diferențe reprezintă variații ale fenotipului, cum ar fi aspectul sau metabolismul, între indivizi.
Tehnica de analiză RFLP
Tehnica de analiză RFLP presupune tăierea unei anumite regiuni din DNA cu variabilitate cunoscută, cu enzime de restricție, apoi separă fragmentele de ADN prin electroforeza cu gel de agaroză și determinând numărul de fragmente și dimensiuni relative.
O enzimă de restricție este o enzimă, o moleculă de proteine, care taie ADN-ul la locurile de restricție. În esență, eșantionul de ADN este descompus și digerat de enzimele de restricție. Fragmentele rezultate sunt separate în funcție de lungimile lor, iar modelul dimensiunilor fragmentelor va diferi pentru fiecare testat.
Procesul complet RFLP necesită marcare de sondă, fragmentare ADN, electroforeză, blotare, hibridizare, spălare și autoradiografie. RFLP detectat este vizualizat folosind o peliculă cu raze X în autoradiografie, unde fragmentele de ADN pot fi vizualizate și analizate după ce sunt separate unele de altele prin electroforeză.
Aplicație pentru utilizare RFLP
Unele dintre aplicațiile pentru analiza RFLP includ:
- Amprenta ADN: Oamenii de știință criminalistică pot folosi analiza RFLP pentru a identifica suspecții pe baza probelor de probe colectate în scenele crimei.
- Paternitate: RFLP este, de asemenea, utilizat în determinarea paternității sau pentru urmărirea strămoșilor.
- Diversitate genetică: Tehnica poate fi folosită în studiul evoluției și migrației faunei sălbatice, studierea modelelor de reproducere la populațiile de animale și detectarea și diagnosticarea anumitor boli.
Tehnica utilizării detectării RFLP a variației genomilor este un instrument vital în cartografierea genomului și analiza bolilor genetice. Dacă locația unei gene specifice a bolii este căutată într-un anumit cromozom, cercetătorii ar face acest lucru analizați ADN-ul membrilor unei familii cu boala, apoi căutați modele similare de moștenire în RFLP alele.
Odată localizată o genă a bolii, efectuarea analizei RFLP asupra altor membri ai familiei ar putea dezvălui un purtător al genelor mutante sau semnalarea riscului global al bolii. Este important de menționat că tehnica RFLP nu este folosită pe scară largă, deoarece tehnici mai noi, mai robuste, sunt utilizate pentru analiza ADN-ului în știința criminalistică și în alte câteva domenii.
Aspecte negative pf RFLP
Din păcate, tehnica de analiză RFLP este obositoare și lentă. În afară de necesitatea unei cantități mari de ADN-eșantion - eșantionul ar trebui să fie de obicei aproximativ de un sfert, care este relativ mare pentru probele de ADN - procesul, de la etichetarea sondelor până la spălare și autoradiografie, poate dura până la o lună completă complet.
Rezultatele proiectului genomului uman au înlocuit practic nevoia de RFLP. Proiectul a permis determinarea întregii secvențe a ADN-ului găsit în celulele umane, genomul uman și identificarea tuturor genelor din genomul uman.