Tamponul TBE (Tris-borat-EDTA) este o soluție tampon formată din baza Tris, acid boric și EDTA (acid etilenediaminetetraacetic). Acest tampon este adesea utilizat pentru electroforeza pe gel de agaroză în analiza produselor ADN care rezultă din amplificarea PCR, protocoale de purificare ADN sau experimente de clonare a ADN-ului.
Utilizări TBE
Tamponul TBE este util în special pentru separarea fragmentelor de ADN mai mici (MW <1000), cum ar fi produse mici din enzima de restricție digestii. TBE are o capacitate mai mare de tamponare și va da o rezoluție mai bruscă decât tamponul TAE. Tamponul TAE (Tris-acetate-EDTA) este o soluție formată din baza Tris, acid acetic și EDTA.
TBE este, în general, mai scump decât TAE și inhibă ligază ADN, ceea ce poate provoca probleme dacă sunt prevăzute etapele ulterioare de purificare ADN și ligare. Cu cei trei pași simpli care urmați, aflați cum să faceți tampon TBE. Crearea nu ar trebui să dureze mai mult de aproximativ 30 de minute.
De ce ai nevoie
Pentru a face tampon TBE, veți avea nevoie de doar patru substanțe. Celelalte elemente din această listă sunt echipamente. Cele patru substanțe necesare sunt sarea disodică EDTA, baza Tris, acidul boric și apa deionizată.
În ceea ce privește echipamentul, veți avea nevoie de un contor de pH și standarde de calibrare, după caz. În plus, veți dori niște pahare sau flacoane de 600 de mililitri și 1500 de mililitri. Îmbunătățirea nevoilor de echipament sunt buteliile gradate, barele de agitare și plăcile de agitare.
Verificați inventarul de la laboratorul pe care îl veți folosi pentru a vă asigura că aveți tot ce aveți nevoie înainte de a începe. Nimic nu este mai rău decât să fii nevoit să te oprești în mijlocul pregătirii unei soluții, deoarece ai rămas fără materiale adecvate.
Dacă laboratorul dvs. este la școală sau la locul de lucru, consultați personalul corespunzător pentru a vedea că au toate elementele în stoc. Dacă faceți acest lucru, vă puteți economisi timp și energie până la urmă.
Greutatea formulei este prescurtată ca FW. Este greutatea atomică a unui element înmulțit cu numărul de atomi ai fiecărui element într-o formulă, adăugând apoi toate masele fiecărui element împreună.
Soluția de stoc a EDTA
O soluție EDTA trebuie pregătită înainte de timp. EDTA nu va intra complet în soluție până când pH-ul nu este ajustat la aproximativ 8,0. Pentru o soluție stoc de 500 de mililitri de 0,5 M EDTA, cântăriți 93,05 grame de sare disodică EDTA (FW = 372,2). Apoi dizolvați-l în 400 de mililitri de apă deionizată și ajustați pH-ul cu NaOH (hidroxid de sodiu). După aceea, adăugați soluția la un volum final de 500 de mililitri.
Soluția stocurilor de TBE
Realizați o soluție stoc concentrată (5x) de TBE cântărind 54 de grame de bază Tris (FW = 121,14) și 27,5 grame de acid boric (FW = 61,83) și dizolvând ambele în aproximativ 900 mililitri deionizate apă. Apoi adăugați 20 mililitri de 0,5 M (molaritate sau concentrație) EDTA (pH 8,0) și reglați soluția la un volum final de 1 litru. Această soluție poate fi păstrată la temperatura camerei, dar în soluții mai vechi se va forma un precipitat. Depozitați tamponul în sticle de sticlă și aruncați dacă s-a format un precipitat.
Soluția de lucru a tuberculozei
Pentru electroforeza cu gel de agaroză, un tampon TBE poate fi utilizat la o concentrație de 0,5x (diluție de 1:10 a stocului concentrat). Se diluează soluția stoc cu 10x în apă deionizată. Concentrațiile finale de solut sunt 45 mM Tris-borat și 1 mM (milimolar) EDTA. Tamponul este acum gata de utilizare în rulând un gel de agaroză.