Tamponul TAE este o soluție formată din baza Tris, acid acetic și EDTA (Tris-acetat-EDTA). Este istoric cel mai frecvent tampon utilizat pentru gelul de agaroză electroforeză în analizele produselor ADN rezultate din PCR amplificare, DNA protocoale de purificare sau Clonarea ADN-ului experimente.
Acest tampon are o rezistență ionică redusă și o capacitate de tamponare redusă. Este cel mai potrivit pentru electroforeza unor bucăți mari de ADN (> 20 kilobaze) și va trebui să fie înlocuită frecvent sau recirculată timp mai lung (> 4 ore) de gel. Având în vedere acest lucru, poate doriți să luați în considerare crearea mai multor serii de tampon.
Având în vedere că tamponul este ușor de făcut și pașii pot fi făcuți rapid, realizarea a mai mult de un lot la un moment dat nu ar trebui să dureze mai mult sau să fie dificil. Folosind instrucțiunile de mai jos, ar trebui să dureze doar 30 de minute pentru a face tamponul TAE.
Ce trebuie pentru tamponul TAE
Deoarece crearea tamponului TAE necesită doar un set rapid de instrucțiuni, numărul de materiale necesare pentru acesta nu este excesiv. Veți avea nevoie doar de sare disodică EDTA (acid etilendiaminetetraacetic), bază de Tris și acid acetic glacial.
Realizarea tamponului necesită, de asemenea, un pHmetru și standarde de calibrare, după caz. De asemenea, veți avea nevoie de pahare sau flacoane de 600 de mililitri și 1500 de mililitri, precum și de cilindri absolvenți. În cele din urmă, veți avea nevoie de apă deionizată, agitați bare și plăci.
În instrucțiunile următoare, greutatea formulei (masa atomică a fiecărui element este înmulțită cu numărul de atomi, apoi masa fiecăruia este adăugată împreună) este prescurtată ca FW.
Pregătiți o soluție de stoc a EDTA
O soluție EDTA este pregătită înainte de timp. EDTA nu va intra complet într-o soluție până când pH-ul nu este ajustat la aproximativ 8,0. Pentru un stoc de 500 de mililitri soluție de 0,5 M (molaritate sau concentrație) EDTA, cântărește 93,05 grame de sare disodică EDTA (FW = 372,2). Se dizolvă într-o apă deionizată de 400 de mililitri și se ajustează pH-ul cu hidroxid de sodiu (NaOH). Adăugați soluția la un volum final de 500 mililitri.
Creați-vă soluția de stoc
Realizați o soluție de 50% concentrată de TAE, cântărind 242 de grame de bază Tris (FW = 121,14) și dizolvând-o în aproximativ 750 de mililitri de apă deionizată. Adăugați cu atenție 57,1 mililitri de acid glacial și 100 mililitri de 0,5 M EDTA (pH 8,0).
După aceea, reglați soluția la un volum final de 1 litru. Această soluție stoc poate fi păstrată la temperatura camerei. PH-ul acestui tampon nu este ajustat și ar trebui să fie de aproximativ 8,5.
Pregătiți o soluție de lucru a tamponului TAE
Soluția de lucru de 1x tampon TAE se realizează prin simpla diluare a soluției stoc cu 50x în apă deionizată. Concentrațiile finale de solut sunt 40 mM (milimolari) Tris-acetat și 1 mM EDTA. Tamponul este acum gata de utilizare în utilizarea unui gel de agaroză.
Înveliți
Verificați inventarul înainte de a începe să vă asigurați că aveți toate materialele de mai sus pentru tamponul TAE. Personalul dvs. de aprovizionare ar trebui să vă poată spune dacă au toate elementele de care aveți nevoie în stoc. Nu doriți să ajungeți să pierdeți ceva în mijlocul procedurii.