Cum se face soluție salină tamponată cu fosfat (PBS)

Soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) este un soluție tampon care este utilizat în mod obișnuit pentru colorarea imunohistochimică (IHC) și este adesea utilizat în cercetarea biologică. PBS este o soluție de sare pe bază de apă care conține fosfat de sodiu hidrogen, clorură de sodiu și, în unele cazuri, clorură de potasiu și fosfat de potasiu dihidrogen.

Imunohistochimia se referă la procesul de detectare a antigenelor, cum ar fi proteinele din celulele a secțiunea țesuturilor prin utilizarea principiului anticorpilor care se leagă în mod specific la antigene din punct de vedere biologic șervețele. Colorarea imunofluorescentă a fost prima metodă de colorare imunohistochimică.

Antigenii devin vizibili atunci când sunt conjugați cu anticorpi folosind coloranți fluorescenți din cauza an reacție de legare a antigenului-anticorp. Acest proces are loc atunci când este activat prin lumina excitantă a unei anumite lungimi de undă sub un microscop fluorescent.

Osmolaritatea și concentrațiile de ioni ale soluțiilor se potrivesc cu cele ale corpului uman - sunt izotonice.

Puteți pregăti PBS în mai multe moduri. Există mai multe formule. Unele dintre ele nu conțin potasiu, în timp ce altele conțin calciu sau magneziu.

Această rețetă este relativ ușoară. Este pentru soluția de stoc 10BS PBS (0.1M). Cu toate acestea, puteți face, de asemenea, o soluție stoc 1X sau puteți începe cu această rețetă 10X și diluați-o la 1X. Întregul proces durează aproximativ 10 minute și este prevăzută și o opțiune pentru adăugarea Tween.

• Fosfat de sodiu monobazic (anhidru)
• Fosfat de sodiu dibazic (anhidru)
• Clorura de sodiu
• Cântăriți și cântăriți bărcile
• Agitator magnetic și bară de agitare
• O sondă de pH care este calibrată și soluții adecvate pentru reglarea pH-ului
• 1L balon volumetric
• Tween 20 (opțional)

1. Cântărește 10,9 g fosfat de sodiu anhidru dibasic (Na2HPO4), 3,2 g fosfat de sodiu anhidru monobazic (NaH2PO4) și 90 g clorură de sodiu (NaCl). Se dizolvă în puțină apă distilată cu 1 L.
2. Reglați pH-ul la 7.4 și ridicați soluția până la un volum final de 1L.
3. Diluează 10X înainte de utilizare și reajustează pH-ul, dacă este necesar.
4. Puteți face o soluție PBS conținând 0,5% Tween 20 adăugând 5 ml Tween 20 la soluția 1L.

Stocați tamponul la temperatura camerei după ce ați făcut soluția PBS.

Reactivi neanhidri pot fi înlocuiți, dar va trebui să recalculați masa corespunzătoare fiecăruia pentru a găzdui moleculele de apă adăugate.

Salina tamponată cu fosfat are multe utilizări, deoarece este izotonică și non-toxică pentru majoritatea celulelor. Poate fi folosit pentru diluarea substanțelor și este adesea folosit pentru clătirea recipientelor de celule. PBS poate fi utilizat ca dilutant în diferite metode pentru uscarea biomoleculelor, deoarece moleculele de apă din ea vor fi structurate în jurul substanței - proteine, de exemplu. Acesta va fi „uscat” și imobilizat pe o suprafață solidă.

PH-ul rămâne constant și constant pentru a preveni distrugerea celulelor.

Pelicula subțire de apă care se leagă de substanță previne denaturarea sau alte modificări conformaționale. Tampoanele carbonate pot fi utilizate în același scop, dar cu o eficiență mai mică.

PBS poate fi de asemenea utilizat pentru a lua un spectru de referință la măsurarea proteină adsorbția în elipsometrie.